Onder vervanging vallen methoden die helemaal of gedeeltelijk proefdiervrij zijn:
- onderzoek met een ‘lagere’ diersoort: het gebruik van ongewervelde dieren (zoals fruitvliegjes) in plaats van gewervelde dieren. Ongewervelde dieren hebben een zeer eenvoudig zenuwstelsel waardoor zij vermoedelijk geen pijn ervaren.
- onderzoek op slachthuismateriaal.